双荧光素酶报告系统
- 检测周期短
- 性价比高
- 稳固性好
- 准时交付
效劳特色
金开瑞应用Promega公司的双荧光素酶报告基因检测(DLR)系统，提供DLR检测效劳。
效劳先容
双荧光素酶检测是转录调控研究中十分主要的实验手段，主要应用于启动子和转录因子，以及miRNA和其靶基因互作的验证。
在双荧光素酶检测中，将萤火虫荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为比照报告基因。实验报告基因用于测试实验条件下基因的表达，而比照报告基因作为内比照。
以荧光素为底物来检测萤火虫荧光素酶活性，荧光素酶可以催化荧光素，在荧光素氧化的历程中会发出生物荧光，然后通过化学发光仪测定。
效劳优势
- 迅速度高：比Western blot迅速度高1000倍以上
- 无报告基因： 植物、哺乳动物中无报告基因内源性表达
- 不受物质影响：荧光素酶检测不受细胞内其它物质影响
- 检测利便/规模广：检测规模广，大于7个数目级
效劳流程
客户提供
基因模板，需提供详细的转录因子、目的基因、或microRNA信息；
实验细胞，如无特殊要求，金开瑞默以为使用293T细胞，则无需提供。
最终交付
- 实验流程及完整报告一份，包括实验原始数据、图片、剖析效果等。
案例展示
常见问题与剖析 (Q&A)
a.启动子结构剖析，将启动子区域序列（通常2k左右）举行分段截短，或对特定位点举行突变，再划分构建入luciferase报告载体，检测其启动子活性。 b.启动子SNP剖析，一些基因的启动子区域保存单核苷酸多态性，可运用荧光素酶报告系统剖析其相对活性。 c.验证特定转录因子同其调控序列的作用，将该序列（通常为启动子区域）插入报告基因载体，同时在实验细胞中共转过表达该转录因子，可剖析转录因子过表达是否提高荧光素酶活性。 d.可以剖析信号通路是否激活，将该信号通路的下游响应原件序列构建入报告基因载体，在差别上游信号条件下，荧光素酶活性代表了通路的下游响应。例如在GPCR研究中，将cAMP response element（CRE）载入报告基因载体，构建稳固表达细胞株后，可以用于剖析GPRC的激活与抑制剂筛选。又如，将HIF1α的响应原件hypoxia-responsive element (HRE)插入luciferase报告载体构建稳转细胞株，可以用于低氧相关通路的研究。 e.验证microRNA的靶序列，将待测的3’UTR序列插入报告基因载体，再共转入该microRNA，若是荧光素酶活性下降，则提醒为其靶序列。
Luciferase的迅速度相比于GFP提高10-100倍以上，同时具有更宽的动态规模，便于数值剖析较量，不需要荧鲜明微镜，并且在活体实验中其荧光穿透性高于EGFP等荧光55402永利mg，同时由于没有内源活性、其本底信号很低。 而GFP等荧光55402永利mg相比于荧光素酶的优势在于可以举行失踪定位，并且其视察不需裂解细胞，利便举行适时视察。
海肾荧光素酶和萤火虫荧光素酶相比，相对活性怎样？ 在氧、镁和ATP的保存下，萤火虫荧光素酶作用于萤火虫荧光素，而泉源于海洋腔肠（Renilla reniformis)的荧光素酶在氧的保存下作用于海肾荧光素。双报告基因手艺（Dual-reporter assays）,团结了萤火虫荧光素酶测试和海肾荧光素酶测试。
转染效率低的话可以从三个方面改善，首先要确保细胞状态是好的，通常我们选来由于破碎期的细胞，另外阳性比照您可以选择过表达的荧光55402永利mg质粒，尚有就是DNA的质量尤为主要，最好是先酶切验证。 这个实验检测效果很迅速，有一定差别是正常的，通常只要确保它在一个数目级之内即可。若是差别凌驾这个规模可以从两方面改善，一是记着坚持样本的均一性，二是加样要准确。
相关资源
1、在双荧光素酶报告系统研究中，一些常用网站、数据库和资源库的简介
● Promega（promega.com）：Promega是一个提供生命科学研究相关产品和效劳的公司。他们提供多种荧光素酶底物和相关试剂盒，供科研职员在双荧光素酶报告系统实验中使用。
● Addgene（addgene.org）：Addgene是一个非营利性的生物资源库，提供了普遍的质粒和表达载体，包括荧光素酶相关的质粒，供研究职员用于基因转染和表达。
● NCBI（www.ncbi.nlm.nih.gov）：NCBI（美国国家生物手艺信息中心）提供了包括PubMed、GenBank、Gene等在内的多个数据库，可用于搜索和获取与双荧光素酶报告系统相关的文献、基因序列和55402永利mg质信息。
● PubChem（pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）：PubChem是NCBI的一个化学物质数据库，提供了大宗的化合物信息和相关的生物活性数据，可以用于荧光素酶底物的筛选和选择。
2、双荧光素酶报告系统的实验办法简介
①细胞作育和处置惩罚：
● 准备和处置惩罚目的细胞，确保其在适当的生长状态下举行实验。
● 维持适当的作育条件，包括作育基因素、温度和湿度等。
②底物处置惩罚：
● 加入荧光素酶底物和葡萄糖氧化酶底物以触发荧光发光反应。
● 优化底物浓度，确保使用浓度适当，以获得稳固且可检测的荧光信号。
③信号检测：
● 使用合适的装备举行荧光或发光信号的检测。
● 选择适当的检测要领，如荧光成像仪、荧光剖析仪或酶标仪。
④数据剖析：
● 举行相对荧光单位的定量剖析，并设置负比照和正比照组。
● 使用合适的数据剖析要领，评估实验效果的特异性和可靠性。
⑤实验重复和统计显著性：
● 举行足够的实验重复以确保效果的可靠性。
● 凭证需要举行统计学剖析，以评估数据的显著性和可靠性。
⑥实验条件控制：
● 坚持实验条件的一致性，包括细胞作育条件、作育基配制、底物制备等。
● 严酷控制实验的时间点和温度，确保实验操作在合适的时间窗口内举行。
⑦数据报告和效果诠释：
● 撰写实验报告或论文，清晰地泛起数据和效果。
● 团结相关配景知识和文献，诠释实验效果的意义和可能的机制。
3、除了双荧光素酶报告系统实验，尚有哪些常用于研究基因表达调控和信号通路活性的实验要领？
① 免疫沉淀（Immunoprecipitation，IP）：
? 使用特异性抗体将目的55402永利mg与其相互作用的分子（如55402永利mg质复合物或DNA序列）团结，并通过沉淀、洗涤和剖析来判断和定量这些相互作用。
② 染色质免疫沉淀（ChIP，ChIP-seq）：
? 使用特异性抗体将某个55402永利mg质与染色质中的靶标位点团结，并通过免疫沉淀和测序手艺，判断和剖析该55402永利mg质在基因组上的团结位点及其调控作用。
③ 55402永利mg质互作剖析：
? 使用55402永利mg质交联、共沉淀和质谱剖析等手艺，判断和剖析55402永利mg质之间的相互作用关系，从而展现基因表达调控和信号通路中的55402永利mg质网络。
④ 基因组学和转录组学剖析：
? 使用高通量测序手艺，如RNA-seq、ChIP-seq和ATAC-seq等，周全剖析基因表达、染色质状态和转录因子团结位点，展现基因调控网络和信号通路的动态转变。
