专业互作研究手艺团队
富厚互作类设计履历
1000+互作实验项目履历
流程设计到手艺实验一站式效劳
miRNA可以与mRNA团结调理体内基因的表达，通过影响蛋?的表达、修饰、酶活性等来调理?运气动的进?。lncRNA作为体内的ceRNA，可以与miRNA团结起到调理基因表达的作?。研究lncRNA与miRNA的相互作?关于研究?命具有主要的意义。
双荧光素酶检测是转录调控研究中?分主要的实验?段，主要应?于启动?和转录因?，以及miRNA和其靶基因互作的验证。
- 在双荧光素酶检测中，将萤??荧光素酶作为实验报告基因，海肾荧光素酶作为比照报告基因。实验报告基因?于测试实验条件下基因的表达，?比照报告基因作为内比照。
- 以荧光素为底物来检测萤??荧光素酶活性，荧光素酶可以催化荧光素，在荧光素氧化的历程中会发出?物荧光，然后通过化学发光仪测定。
● 转录因?与启动?
将启动子序列构建到萤火虫荧光素酶基因前，同时过表达转录因子。当转录因子与启动子上特异团结位点团结后激活荧光素酶基因转录，使萤火虫荧光素酶得以表达，最终荧光强度上升 ；当团结位点被突变后，转录因子无法与启动子团结，因此荧光值无显着转变。
● miRNA与靶基因
将靶基因序列构建到萤火虫荧光素酶基因3'区域，同时过表达microRNA。当microRNA与靶基 因上特异团结位点团结后，将滋扰荧光素酶mRNA的翻译或导致其迅速降解，使荧光强度降低 ；当团结位点被突变后，microRNA无法与靶基因团结，因此荧光值无显着转变。
YY1-mediated reticulocalbin-2 upregulation promotes the hepatocellular carcinoma progression via activating MYC signaling.
期刊：Am J Cancer Res IF：5.177
Schematic illustration of YY1 binding site on the wild type and mutant RCN2 promotor. Fluorescence activity in Huh7 cells with RCN2 wildtype and mutant promotor with YY1 pcDNA3.1.
55402永利mg与核酸的相互作用普遍保存于生运气动的调理中 ；虻母粗啤⒆肌⒎搿⑿奘蔚壤潭祭氩豢怂岷55402永利mg的互作。金开瑞提供RNA pull down+质谱、双荧光素酶、染色质免疫共沉淀、凝胶迁徙或电泳迁徙率检测（EMSA）、酵母单杂交、DNA pull down等手艺来检测DNA/RNA与55402永利mg的相互作用。
凝胶迁徙或电泳迁徙率检测（Electrophoretic Mobility Shift Assay，EMSA）是一种检测55402永利mg质和DNA 序列相互团结的手艺，可用于定性和定量剖析。现在已用于研究DNA 团结55402永利mg和特定的DNA 序列的相互作用，是转录因子研究的经典要领。
金开瑞提供EMSA 检测手艺效劳，资助您检测DNA 团结55402永利mg、RNA 团结55402永利mg、特定的55402永利mg质。
目的55402永利mg与生物素标记的DNA探针团结，电泳时55402永利mg-DNA复合物比无55402永利mg团结的DNA探针在凝胶中泳动的速率慢，显影泛起相对滞后条带。
Functional Analysis of IRF1 Reveals its Role in the Activation of the Type I IFN Pathway in Golden Pompano, Trachinotus ovatus (Linnaeus 1758).
期刊：Int J Mol Sci. IF：4.183
Binding reactions of IRF1 and ToIFNa3 prompter. Biotin-labeled EMSA probes were incubated with lysates of HEK293T cells containing ToIRF1 protein.WT,wild-type probe;MT:mutated probe.1,negative control;2,positive control;3,plus ToIFNa3-P2-WT5;4,ToIFNa3-P2-WT5 plus ToIRF1-Flag;5,plus ToIFNa3-P2-MT5;6,ToIFNa3-P2-MT5 plusToIRF1-Flag.
ChIP染色体免疫共沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是用来研究55402永利mg质与DNA是否在体内保存相互作用，这项手艺资助研究者判断在细胞核中基因组的某一特定位置会泛起何种组55402永利mg修饰。使用抗体抗原特异性团结，将与目的55402永利mg相团结的DNA片断沉淀下来，能够真实地反应团结在DNA序列上的调控55402永利mg。
YAP inhibits autophagy and promotes progression of colorectal cancer via upregulating Bcl-2 expression
期刊：Cell Death Dis IF：6.304
C ChIP-qPCR was performed in SW620 cells transfected with pcDNA3.1-HA-YAP to identify the enrichment of HA-YAP onto Bcl-2 promoter region. IgG served as an antibody control.
DNA pull down是用于剖析55402永利mg质与DNA互作的一种剖析手艺。一样平常来说，该实验首先需要针看待研究目的基因的调控区域设计并制备特异性探针（以脱硫生物素标记为主流） ；同时，制备细胞核提取物 ；将探针和核提取物配合孵育，DNA团结55402永利mg就会和靶向序列特异性团结 ；然后，通过亲和素磁珠纯化55402永利mg质DNA复合物 ；最后针对获得的55402永利mg，使用WB验证或者质谱方法判断55402永利mg质类型。
应用：寻找已知的启动子序列所团结的未知55402永利mg（转录因子）
效果：实验组和比照组之间保存差别条带
酵母单杂交手艺是在酵母双杂基础上生长而来的一种研究核酸-55402永利mg相互作用的工具，被普遍用于研究真核细胞内基因的表达调控，如判别DNA团结位点发明潜在的团结55402永利mg基因、剖析DNA团结结构域信息等。
| 项目名称 | 应用 | 互补实验 |
|---|---|---|
| 酵母杂交文库构建 | 酵母杂交筛选 | / |
| 酵母单/双杂交验证 | 已知55402永利mg与55402永利mg/启动子之间的互作 | EMSA，双荧光素酶，Co-IP，GST pulldown |
核酵母单/双杂交系统原理：酵母转录因子Gal4包括DNA团结结构域（Gal4-BD）和转录激活域（Gal4-AD），诱饵（prey）与Gal4-BD融合，猎物（bait）55402永利mg与Gal4-AD融合，当诱饵和猎物爆发相互作用时，Gal4-BD和Gal4-AD在空间上充分靠近，可泛起完整的GAL4转录因子活性，启动激活报告基因AUR1-C、ADE2、HIS3和MEL1的转录。
1: Pabai-Bait+PGADT7(自激活验证)
2: Pabai-Bait+PGADT7-Prey(实验组)
+: Pabai-P53+PGADT7-53(阳性比照)
- : Pabai-P53+PGADT7(阴性比照)
55402永利mg质与RNA 的相互作用是许多细胞功效的焦点，如55402永利mg质合成、mRNA 组装、病毒复制、细胞发育调控等。使用体外转录法标记生物素RNA 探针，然后与胞浆55402永利mg提取液孵育，形成RNA-55402永利mg质复合物。该复合物可与链霉亲和素标记的磁珠团结，从而与孵育液中的其他因素疏散。复合物洗脱后，通过WB 实验检测特定的RNA 团结55402永利mg是否与RNA 相互作用。若待检测目的55402永利mg明确，选择WB判断 ；若不明确，则可选择质谱判断。
金开瑞现提供RNA pull down 检测手艺效劳, 使用特异性二抗举行检测，能有用阻止抗体重链对效果的信号滋扰。并且金开瑞配套自己的质谱平台，能显著提升检测效果。
Circular RNA circEsyt2 regulates vascular smooth muscle cell remodeling via splicing regulation
期刊：J Clin Invest IF：11.864
CircEsyt2 inhibits the nuclear trafficking of PCBP1 by binding directly to PCBP1. (A) Western blotting of proteins pulled down by control and circEsyt2 probes in circEsyt2-OE HEK293T cells using the PCBP1 antibody. (B) Identification of circEsyt2-binding proteins. Left: silver staining of pulled-down proteins in circEsyt2-OE HEK293T cells. Right: mass spectrometry showing the main proteins pulled down by the circEsyt2 probe.
RIP 手艺（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay，RNA 团结55402永利mg免疫沉淀）主要是运用针对目的55402永利mg的抗体把响应的RNA-55402永利mg复合物沉淀下来，然后经由疏散纯化就可以对团结在复合物上的RNA 举行q-PCR验证或者测序剖析。RIP 是研究细胞内RNA 与55402永利mg团结情形的手艺，是相识转录后调控网络动态历程的有力工具，可以资助我们发明miRNA 的调理靶点。
凭证客户需求，金开瑞可以提供RNA/55402永利mg、RNA/RNA互作验证RIP手艺效劳。
CircPVT1 promotes proliferation of lung squamous cell carcinoma by binding to miR-30d/e
期刊：J Exp Clin Cancer Res IF：11.161
c RIP confirmed the relationship between circPVT1 and HuR in H520 cells. GAPDH mRNA was used as a non-HuR target control.
使用带有标签的已知55402永利mg作为诱饵55402永利mg（最常用的是GST标签，即谷胱甘肽巯基转移酶，glutathione S-transferase），诱饵55402永利mg特异性团结谷胱甘肽亲和树脂，当目的55402永利mg溶液过柱时，将诱饵55402永利mg及其相互作用的55402永利mg复合物捕获。复合物洗脱后，通过55402永利mg凝胶电泳剖析两种55402永利mg间的相互作用，或者筛选响应的目的55402永利mg。
Aberrant oligodendroglial LDL receptor orchestrates demyelination in chronic cerebral ischemia
期刊：J Clin Invest IF：11.864
(C) GST pull-down assay revealing the interaction between LDLR and Shc (n = 3 in each group).
免疫共沉淀手艺（co-Immunoprecipitation, co-IP）是一种研究两种55402永利mg在体内是否保存相互作用的有用要领，通过抗体和已知55402永利mg团结，从而捕获整个已知55402永利mg复合物，进而研究复合物中与已知55402永利mg保存相互作用的55402永利mg。
Aberrant oligodendroglial LDL receptor orchestrates demyelination in chronic cerebral ischemia
期刊：J Clin Invest IF：11.864
LDLR protects against demyelination by binding Shc and activating downstream MEK/ERK signaling. (A) Immunoassay of lysates of cerebral CC tissue after immunoprecipitation with LDLR, analyzed by immunoblotting (IB) with anti-LDLR and anti-Shc (n = 3 in each group).
酵母双杂交及系统是一种判断和检测55402永利mg质相互作用的研究要领，因其具有迅速性高、功效强盛、适用规模广等特点，现已被应用于多个研究领域。
金开瑞可提供酵母杂交文库构建、核酵母双杂交筛选、膜酵母双杂交筛选、酵母单/双杂交验证效劳。
| 项目名称 | 应用 | 互补实验 |
|---|---|---|
| 酵母杂交文库构建 | 酵母杂交筛选 | / |
| 核酵母双杂交筛选 | 获得与已知55402永利mg互作的未知55402永利mg | COIP，GST pulldown |
| 膜酵母双杂交筛选 | 研究膜55402永利mg之间的互作 | COIP，GST pulldown |
| 酵母单/双杂交验证 | 已知55402永利mg与55402永利mg/启动子之间的互作 | EMSA，双荧光素酶，COIP，GST pulldown |
膜酵母双杂交系统原理：泛素ubiquitin包括N 端（Nub），C 端（Cub）结构域。首先，人为的将泛素 Nub的第3位异亮氨酸突变为甘氨酸（NubI 突变为 NubG）。这样与 Cub 的亲协力大大降低，阻止了 Cub 和 Nub 自我团结或靠近的可能性。在Cub结构域融合LexA-VP16 转录激活因子形成Cub-LexA-VP16。诱饵55402永利mg（prey）与NubG融合，猎物55402永利mg（bait）与Cub-LexA-VP16融合。，当当诱饵和猎物爆发相互作用时， NubG 和 Cub 的相互靠近，团结，形成完整泛素ubiquitin，从而被 UBPs 酶识别，导致 LexA-VP16 的剪切，进入核内，从而激活报告基因AUR1-C、ADE2、HIS3和MEL1的转录。
① 酵母杂交文库构建
图?泉源于 Xu et al. BMC Biotechnology (2020) 20:4
② 酵母双杂交筛选
阳性效果点钟SD/-Leu/-Trp/-HIS3/-ADE2+X-α-gal平板
图?泉源于 Xu et al. BMC Biotechnology (2020) 20:4
阳性效果PCR判断
图?泉源于 Xu et al. BMC Biotechnology (2020) 20:4
③ 酵母杂交验证（可用于文章揭晓）
1: PGBKT7-Bait+PGADT7(?激活验证)
2: PGBKT7-Bait+PGADT7-Prey(实验组)
+: PGBKT7-53+PGADT7-T(阳性比照)
- : PGBKT7-lam+PGADT7-T(阴性比照)
双分子荧光互补（Bimolecular Fluorescent Complimentary，BiFC）手艺基于55402永利mg质片断互补的原理，用于研究55402永利mg质间的相互作用。其原理是将荧光55402永利mg（如绿色荧光55402永利mgGFP、黄色荧光55402永利mgYFP等）切割为两个互补但各自不发光的片断（如N端和C端片断），划分与待检测的55402永利mg质A和B融合表达。当55402永利mg质A与55402永利mg质B在细胞内爆发相互作用时，荧光55402永利mg片断靠近并重组为完整的荧光55402永利mg，从而在显微镜下爆发荧光信号，直观地反应了55402永利mg质间的相互作用。
分子、细胞、个体水平上的机制研究、功效研究、表型研究是生物学研究中的热门。分子（核酸与核酸、核酸与55402永利mg、55402永利mg与55402永利mg）互作研究是机制研究的主要组成部分，是功效、表型研究的进一步深化。随着人类基因组妄想的完成，后基因组时代的深入，测序、质谱、生物信息团结剖析等手艺的进一步生长，使得高通量筛选生物标记物、寻找生物关联分子变得可能，同时对分子互作手艺的应用提出了更高的要求。
金开瑞多年来致力于分子互作机制研究，组建了专门的分子互作研究手艺团队，拥有富厚的互作类项目设计、实验履历，可以为您提供核酸与核酸、核酸与55402永利mg、55402永利mg与55402永利mg间等种种从计划流程设计到手艺实验的整套互作研究效劳。
别的，金开瑞生物还特殊推出了多款高效、轻盈且经济实惠的互作剖析小规格试剂盒，包括但不限于RIP kit(6T)、Co-IP kit(动物/植物)(6T)、ChIP kit(动物/植物)(6T)、RNA pull-down kit(6T)、银染试剂盒(10T/20T/40T)、DNA pull-down kit(动物/植物)(6T)和双荧光素酶报告基因检测试剂盒(50T)，旨在为您的研究提供更多的选择，接待采购。
